PCR實(shí)驗(yàn)室是所有的實(shí)驗(yàn)室種類中,對(duì)區(qū)域劃分與環(huán)境潔凈度的要求非常高的實(shí)驗(yàn)室之一。要保證PCR實(shí)驗(yàn)室的成功建設(shè)就要遵守各個(gè)環(huán)節(jié)各個(gè)細(xì)節(jié)的設(shè)計(jì)原則。下面針對(duì)各個(gè)環(huán)節(jié)的設(shè)計(jì),來簡析一下PCR實(shí)驗(yàn)室的裝修要點(diǎn)。
一、PCR實(shí)驗(yàn)室裝修知識(shí)
這里著重介紹PCR實(shí)驗(yàn)室裝修的功能區(qū)劃分,建議從3方面來考慮,即:普通實(shí)驗(yàn)區(qū)、污染控制區(qū)、氣流組織。
1.普通實(shí)驗(yàn)區(qū):包括產(chǎn)物分析區(qū)、擴(kuò)增區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)、試劑準(zhǔn)備區(qū)這4個(gè)區(qū)域。
2.污染控制區(qū):此區(qū)域的規(guī)劃有3套方案,第1套為各功能間相互串通,以套間方式進(jìn)入人流/物流;第2套為設(shè)置獨(dú)立緩沖間,人流/物流分道,流程相鄰間設(shè)置物流傳遞窗;第3套為設(shè)置共用緩沖間/緩沖走廊。
3.氣流組織:PCR實(shí)驗(yàn)室裝修的氣流組織需要從原始試劑混配室、DNA提取室、PCR擴(kuò)增室、檢測(cè)室、送風(fēng)口這5方面來考慮。
①原始試劑混配室:房間壓差為正壓,配備有潔凈工作臺(tái),以防止其他功能間對(duì)本房間的污染。
②DNA提取室:房間壓差為負(fù)壓,配備有排風(fēng)系統(tǒng),以防止提取核酸產(chǎn)生的氣溶膠對(duì)工作人員的傷害及擴(kuò)散污染。
③PCR擴(kuò)增室:房間壓差為負(fù)壓,與DNA提取室一樣,配備有排風(fēng)系統(tǒng),以防止擴(kuò)增產(chǎn)物造成的擴(kuò)散污染。
④檢測(cè)室:房間壓差為負(fù)壓,與DNA提取室、PCR擴(kuò)增室一樣,配備有排風(fēng)系統(tǒng),以防止相關(guān)污染。
⑤送風(fēng)口:采用的是頂送風(fēng),側(cè)下回/排風(fēng)方式。
二、PCR實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)知識(shí)
這里著重介紹PCR走廊、傳遞窗這2方面的最新知識(shí)。
1.PCR走廊:并不是標(biāo)配,進(jìn)深不夠時(shí)不要做PCR走廊,且PCR走廊會(huì)增加交叉污染。
這4個(gè)分區(qū)(試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)、核算擴(kuò)增區(qū)、產(chǎn)物分析區(qū))原本就不需連接在一起。且在物理空間上必須是完全相互獨(dú)立的,各區(qū)域無論在空間上還是在使用中,應(yīng)當(dāng)始終處于完全的分隔狀態(tài),不能有空氣的直接相通。
2.傳遞窗:并非必須設(shè)置(只要不涉及潔/污分流就不需要設(shè)置傳遞窗),但一般實(shí)驗(yàn)機(jī)構(gòu)/實(shí)驗(yàn)人員都設(shè)置。
傳遞窗的本質(zhì)——同緩沖間,是物流的緩沖間。在PCR實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)中,試劑準(zhǔn)備和標(biāo)本制備間是重點(diǎn)保護(hù)的區(qū)域,此處也可以不要傳遞窗,防止交叉污染。實(shí)驗(yàn)中的污染風(fēng)險(xiǎn)主要來自于核酸擴(kuò)增時(shí)的加樣行為,但由于操作在生物安全柜內(nèi)進(jìn)行,且確??諝獠煌庖?,因此不存在污染。
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